使用
ELISA試劑盒進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽(yáng)性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，說明有非特異性反應(yīng)。
在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其中包括：
固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg／ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí)，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg／ml。
為了確保實(shí)驗(yàn)的成功，ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中需留心下列的細(xì)節(jié)
1、嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)刻和溫度進(jìn)行溫育以保證成果。一切試劑都必須在運(yùn)用前到達(dá)室溫20-25℃。運(yùn)用后當(dāng)即冷藏保存試劑。
2、洗板不正確能夠?qū)е虏坏某晒?。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔枯燥掉。
3、消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
4、底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的色彩，現(xiàn)已變藍(lán)的底物液不能運(yùn)用。
5、防止試劑和標(biāo)本的穿插污染以免形成錯(cuò)誤成果。
6、在儲(chǔ)存和溫育時(shí)防止強(qiáng)光直接照射。
7、平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8、任何反響試劑不能觸摸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)損壞試劑盒中反響試劑的生物活性。
9、不能運(yùn)用過期產(chǎn)品。
10、假如可能傳播疾病，一切的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)設(shè)備。
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